[发明专利] 一种慢病毒转移载体、表达PylRS及tRNACUA的细胞系及制备方法与应用 – CN114107394A 全文链接一   全文链接二

 
基本信息
申请号
CN202111305716.9
申请日
20211105
公开(公告)号
CN114107394A
公开(公告)日
20220301
申请(专利权)人
中国科学院精密测量科学与技术创新研究院
申请人地址
430071 湖北省武汉市武昌区小洪山西30号
发明人
韩增鹏;刘奇;徐富强;骆能松;林坤章;王杰;吴阳 专利类型 发明专利
摘要
本发明公开了一种慢病毒转移载体、表达PylRS及tRNACUA的细胞系及制备方法与应用。首先构建编码吡咯赖氨酸氨酰tRNA合成酶及tRNACUA的慢病毒转移载体(SEQ ID NO:2),然后通过细胞转染拯救携载了上述目的元件的慢病毒,并将慢病毒以高MOI感染HEK293T细胞,传代5次后挑单克隆做PCR鉴定获得稳定细胞系。为了验证细胞系对目的蛋白掺入非天然氨基酸的效果,制备了绿色荧光蛋白报告质粒pcDNA3.1‑EGFP‑Y39TAG(SEQ ID NO:3),通过该报告质粒转染验证了上述稳定细胞系的功能。
主权项
1.一种慢病毒转移载体,用于编码吡咯赖氨酸氨酰tRNA合成酶及tRNACUA,所述的慢病毒转移载体由骨架载体和插入其克隆位点PacI和KpnI之间的如SEQ ID.No.1所示的核苷酸序列,如SEQ ID.No.1所示的核苷酸序列包含hUbC启动子‑PylRS‑WPRE片段及2个拷贝的U6启动子‑tRNACUA片段,所述慢病毒转移载体的核苷酸序列如SEQ ID.No.2所示,骨架载体为FUGW载体。

 

 
IPC信息
IPC主分类号
C12N15/867
C 化学;冶金

C12 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程

C12N 微生物或酶;其组合物;繁殖、保藏或维持微生物;变异或遗传工程;培养基

C12N15/867 逆转录病毒载体〔7〕

 

 
法律状态信息
法律状态公告日
20220301
法律状态
公开 法律状态信息
CN202111305716 20220301 公开 公开

 

 
代理信息
代理机构名称
武汉宇晨专利事务所(普通合伙) 42001
代理人姓名
庞宽